Snákaeitur inniheldur ensím sem vatnsrofa karboxýlestertengi.Hvarfefnin fyrir vatnsrof eru fosfólípíð, asetýlkólín og arómatískt asetat.Þessi ensím innihalda þrjár tegundir: fosfólípasa, asetýlkólínesterasa og arómatískan esterasa.Arginine esterasi í snákaeitri getur einnig vatnsrofið tilbúið arginín eða lýsín, en það vatnsrofir aðallega prótein peptíðtengi í náttúrunni, svo það tilheyrir próteasa.Ensímin sem fjallað er um hér verka aðeins á ester hvarfefni og geta ekki virkað á nein peptíðtengi.Meðal þessara ensíma eru líffræðileg virkni asetýlkólínesterasa og fosfólípasa mikilvægari og hafa verið rannsökuð að fullu.Sum snákaeitur hafa sterka arómatíska esterasavirkni, sem getur vatnsrofið p-nítrófenýletýlester, a – eða P-naftalenasetat og indóletýlester.Enn er ekki vitað hvort þessi virkni er framleidd af óháðu ensími eða þekktri aukaverkun karboxýlesterasa, hvað þá líffræðilega mikilvægi þess.Þegar eitur Agkistrodon halys Japonicus var hvarfað með p-nítrófenýletýlesteri og indóletýlesteri fundust vatnsrof p-nítrófenóls og indólfenóls ekki;Þvert á móti, ef þessir esterar bregðast við cobra Zhoushan undirtegund snákaeiturs og Bungarus multicinctus snákaeitur, verða þeir fljótt vatnsrofnir.Það er vitað að þessi kóbraeitur hafa sterka kólínesterasavirkni, sem gæti verið ábyrg fyrir vatnsrof á ofangreindum hvarfefnum.Reyndar, Mclean o.fl.(1971) greindi frá því að mörg snákaeitur sem tilheyra Cobra fjölskyldunni geti vatnsrofið indól etýl ester, naftalen etýl ester og bútýl naftalen ester.Þessi snákaeitur koma frá: kóbra, svartháls kóbra, svartan kóbra, gylltan kóbra, egypska kóbra, kóbra, gyllta kóbra mamba, svarta mamba og hvíta leppa mamba (D. aw þekkir enn austan rhombola skröltorm
Snákaeitrið getur vatnsrofið metýlindól etýlester, sem er hvarfefnið til að ákvarða kólínesterasavirkni í sermi, en þetta snákaeitur sýnir ekki kólínesterasavirkni.Þetta sýnir að það er óþekktur esterasi í cobra eitri, sem er ólíkur kólínesterasi.Til að skilja eðli þessa ensíms þarf frekari aðskilnaðarvinnu.
1、 Fosfólípasa A2
(I) Yfirlit
Fosfólípasi er ensím sem getur vatnsrofið glýserýlfosfat.Það eru 5 tegundir af fosfólípasa í náttúrunni, nefnilega fosfólípasa A2 og fosfólípasa
A. , fosfólípasa B, fosfólípasa C og fosfólípasa D. Snákaeitrið inniheldur aðallega fosfólípasa A2 (PLA2), nokkur snákaeitur innihalda fosfólípasa B og aðrir fosfólípasar finnast aðallega í dýravef og bakteríum.Mynd 3-11-4 sýnir verkunarstað þessara fosfólípasa við vatnsrof hvarfefnis.
Meðal fosfólípasa hefur PLA2 verið rannsakað meira.Það gæti verið mest rannsakaða ensímið í eitri snáka.Hvarfefni þess er estertengi á annarri stöðu Sn-3-glýserófosfats.Þetta ensím er víða að finna í snákaeitri, býflugnaeitri, sporðdrekaeitri og dýravef, og PLA2 er mikið í fjórum snákaeitrum.Vegna þess að þetta ensím brýtur rauð blóðkorn og veldur blóðlýsu er það einnig kallað „hemolysin“.Sumir kalla einnig PLA2 hemólýtísk lesitínasa.
Ludeeke komst fyrst að því að eitur snáka getur framleitt blóðlýsandi efnasamband með því að virka á lesitín í gegnum ensím.Síðar, Delezenne o.fl.sannað að þegar kóbraeitur virkar á hrossasermi eða eggjarauða myndar það hemólýtandi efni.Nú er vitað að PLA2 getur beinlínis virkað á fosfólípíð rauðkornahimnunnar, eyðilagt byggingu rauðkornahimnunnar og valdið beinni blóðlýsu;Það getur einnig virkað á sermi eða viðbætt lesitín til að framleiða hemólýtískt lesitín, sem verkar á rauð blóðkorn til að framleiða óbeina blóðlýsu.Þrátt fyrir að PLA2 sé mikið í fjórum fjölskyldum snákaeitra, þá er innihald ensíma í ýmsum snákaeitrum aðeins öðruvísi.Skröltormur (C
Snákaeitur sýndi aðeins veika PLA2 virkni.Tafla 3-11-11 sýnir samanburð á PLA2 virkni 10 helstu eitra eitraðra snáka í Kína.
Tafla 3-11-11 Samanburður á fosfólípasa VIII starfsemi 10 snákaeitra í Kína
Snákaeitur
Fitulosun
Alifatísk sýra,
Cjumol/mg)
Blóðlýsuvirkni CHU50/^ g * ml)
Snákaeitur
Losaðu fitusýrur
(^raol/mg)
Blóðlýsuvirkni “(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
ellefu
Micracephal ophis
fimm komma eitt núll
kalyspallas
8. 68
tvö þúsund og átta hundruð
gracilis
V, bráð
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
þrjú komma átta tvö
hundrað og fjörutíu
Bnugarus fasctatus
7,56
tvö hundruð og áttatíu
B. multicinctus
eitt stig níu sex
tvö hundruð og áttatíu
Viper og russelli
sjö stig núll þrjú
T, mucrosquamatus
eitt stig átta fimm
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Aðskilnaður og hreinsun
Innihald PLA2 í snákaeitri er mikið og það er stöðugt fyrir hita, sýru, basa og eðlisvanda, þannig að auðvelt er að hreinsa og aðskilja PLA2.Algeng aðferð er að framkvæma fyrst hlaupsíun á hráa eitrinu, framkvæma síðan jónaskiptaskiljun og síðan má endurtaka næsta skref.Það skal tekið fram að frostþurrkun PLA2 eftir jónaskiptaskiljun ætti ekki að valda samloðun, því frostþurrkunarferlið eykur oft jónastyrkinn í kerfinu, sem er mikilvægur þáttur sem veldur samloðun PLA2.Til viðbótar við ofangreindar almennar aðferðir hafa eftirfarandi aðferðir einnig verið notaðar: ① Wells o.fl.② Hvarfefnishliðstæðan PLA2 var notuð sem bindill fyrir sækniskiljun.Þessi bindill getur tengst PLA2 í snákaeitri með Ca2+.EDTA er aðallega notað sem skolefni.Eftir að Ca2+ er fjarlægt minnkar sæknin milli PLA2 og bindils og hægt er að aðgreina hann frá bindli.Aðrir nota 30% lífræna lausn eða 6mól/L þvagefni sem skolefni.③ Vatnsfælin litskiljun var gerð með PheiiylSephar0SeCL-4B til að fjarlægja snefil af PLA2 í hjartaeitur.④ And PLA2 mótefni var notað sem bindill til að framkvæma sækniskiljun á PLA2.
Hingað til hefur mikill fjöldi snákaeiturs PLAZ verið hreinsaður.Tu et al.(1977) skráði PLA2 hreinsað úr snákaeitri fyrir 1975. Á undanförnum árum hefur verið greint frá miklum fjölda greina um aðskilnað og hreinsun PLA2 á hverju ári.Hér leggjum við áherslu á aðskilnað og hreinsun PLA af kínverskum fræðimönnum.
Chen Yuancong o.fl.(1981) skildu þrjár PLA2 tegundir frá eitri Agkistrodon halys Pallas í Zhejiang, sem má skipta í súrt, hlutlaust og basískt PLA2 í samræmi við jafnrafmagnspunkta þeirra.Samkvæmt eituráhrifum þess er hlutlaust PLA2 eitraðra, sem hefur verið skilgreint sem taugaeitur fyrir taugamótun Agkistrodotoxin.Basískt PLA2 er minna eitrað og súrt PLA2 hefur nánast engin eituráhrif.Wu Xiangfu o.fl.(1984) báru saman eiginleika þriggja PLA2, þar á meðal mólþunga, amínósýrusamsetningu, N-enda, jafnrafmagn, hitastöðugleika, ensímvirkni, eiturhrif og blóðlýsuvirkni.Niðurstöðurnar sýndu að þær höfðu svipaðan mólþunga og hitastöðugleika, en höfðu verulegan mun á öðrum þáttum.Að því er varðar ensímvirkni var súrensímvirkni meiri en basísk ensímvirkni;Blóðlýsuáhrif basísks ensíms á rauð blóðkorn í rottum voru sterkust, þar á eftir kom hlutlaust ensím og súrt ensím var varla blóðrofið.Þess vegna er getgátur um að blóðlýsuáhrif PLAZ tengist hleðslu PLA2 sameindarinnar.Zhang Jingkang o.fl.(1981) hafa búið til Agkistrodotoxin kristalla.Tu Guangliang o.fl.(1983) greindi frá því að eitrað PLA með jafnrafmagnspunkt 7,6 væri einangrað og hreinsað úr eitri Vipera rotundus frá Fujian, og eðlis- og efnafræðilegum eiginleikum þess, amínósýrusamsetningu og röð 22 amínósýruleifa við N. -enda voru ákvörðuð.Li Yuesheng o.fl.(1985) einangraði og hreinsaði annað PLA2 úr eitri Viper rotundus í Fujian.Undireining PLA2 * er 13 800, jafnrafmagnið er 10,4 og sértæk virkni er 35/xnioI/miri mg。 Með lesitín sem hvarfefni er ákjósanlegur pH ensímsins 8,0 og ákjósanlegur hiti er 65 ° C LD5 sprautað í bláæð í músum.Það er 0,5 ± 0,12mg/kg.Þetta ensím hefur augljós segavarnarlyf og blóðlýsandi áhrif.Eitrað PLA2 sameindin samanstendur af 123 leifum af 18 tegundum amínósýra.Sameindin er rík af cysteini (14), asparaginsýru (14) og glýsíni (12), en inniheldur aðeins eitt metíónín og N-enda hennar er serínleifar.Samanborið við PLA2 einangrað af Tuguang er mólþungi og fjöldi amínósýruleifa tveggja ísóensíma mjög svipaður og amínósýrusamsetningin er líka mjög svipuð, en fjöldi aspartínsýru og prólínleifa er nokkuð mismunandi.Guangxi king cobra snákaeitur inniheldur mikið PLA2.Shu Yuyan o.fl.(1989) einangruðu PLA2 úr eitrinu, sem hefur sértæka virkni sem er 3,6 sinnum meiri en upprunalega eitrið, mólþyngd 13000, samsetning 122 amínósýruleifa, jafnrafmagnspunktur 8,9 og góðan hitastöðugleika.Af rafeindasmásjá athugun á áhrifum grunn PLA2 á rauð blóðkorn má sjá að það hefur augljós áhrif á himnu rauðra blóðkorna manna, en hefur engin augljós áhrif á rauð blóðkorn úr geitum.Þessi PLA2 hefur augljós hægfaraáhrif á rafhleðsluhraða rauðra blóðkorna í mönnum, geitum, kanínum og naggrísum.Chen o.fl.Þetta ensím getur hindrað samloðun blóðflagna framkallað af ADP, kollageni og natríumarakidonsýru.Þegar styrkur PLA2 er 10/xg/ml~lOOjug/ml, er samloðun blóðflagna algjörlega hindruð.Ef þvegnar blóðflögur voru notaðar sem efni gæti PLA2 ekki hamlað samloðun í styrknum 20Mg/ml.Aspirín er hemill sýklóoxýgenasa, sem getur hamlað áhrifum PLA2 á blóðflögur.PLA2 getur hindrað samloðun blóðflagna með því að vatnsrofa arakídonsýru til að mynda thromboxan A2.Uppbygging lausnar PLA2 framleidd af Agkistrodon halys Pallas eitri í Zhejiang héraði var rannsökuð með hringlaga tvískinnungi, flúrljómun og UV frásog.Tilraunaniðurstöðurnar sýndu að aðalkeðjubygging þessa ensíms var svipuð og sams konar ensíms frá öðrum tegundum og ættkvíslum, sköpun beinagrindarinnar hafði góða hitaþol og byggingabreyting í súru umhverfi gekk til baka.Samsetning virkjarans Ca2+ og ensíms hefur ekki áhrif á umhverfi tryptófanleifa, en hemillinn Zn2+ gerir hið gagnstæða.Leiðin sem pH gildi lausnar hefur áhrif á ensímvirkni er frábrugðin ofangreindum hvarfefnum.
Í ferlinu við PLA2 hreinsun snákaeiturs er augljóst fyrirbæri að snákaeitur inniheldur tvo eða fleiri PLA2 skolunartinda.Þetta fyrirbæri má útskýra á eftirfarandi hátt: ① vegna tilvistar ísósíma;② Ein tegund af PLA2 er fjölliðuð í margs konar PLA2 blöndur með mismunandi mólmassa, sem flestar eru á bilinu 9 000 ~ 40 000;③ Samsetning PLA2 og annarra snákaeiturhluta flækir PLA2;④ Vegna þess að amíðtengi í PLA2 er vatnsrofið breytist hleðslan.① Og ② eru algengar, með aðeins örfáum undantekningum, eins og PLA2 í CrWa/w snákaeitri
Það eru tvær aðstæður: ① og ②.Þriðja ástandið hefur fundist í PLA2 í eitri eftirtalinna snáka: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, palestínsk nörunga, sandorm og hræðileg skröltorm km.
Niðurstaðan í tilviki ④ gerir það að verkum að flæðishraðinn PLA2 breytist við rafnám, en amínósýrusamsetningin breytist ekki.Peptíð er hægt að brjóta með vatnsrofi, en almennt eru þau enn bundin saman með tvísúlfíðtengjum.Eitrið úr austurhluta skröltormsins inniheldur tvær tegundir af PLA2, kölluð tegund a og tegund p PLA2 í sömu röð.Munurinn á þessum tveimur gerðum af PLA2 er aðeins ein amínósýra, það er að segja að glútamín í einni PLA2 sameind er skipt út fyrir glútamínsýru í hinni PLA2 sameindinni.Þó að nákvæmlega ástæðan fyrir þessum mun sé ekki ljós, er almennt talið að það tengist deamíneyðingu á PLA2.Ef PLA2 í palestínska vipereitrinu er haldið heitu með hráa eitrinu, verða endahóparnir í ensímsameindum þess fleiri en áður.Frá C PLA2 einangrað úr snákaeitri hefur tvo mismunandi N-enda og mólþunga þess er 30000. Þetta fyrirbæri getur stafað af ósamhverfu dimer PLA2, sem er svipað og samhverfa dimer sem myndast af PLA2 í eitri austurlens tígulbaks skröltorms og vestur tígulbaks skröltormur.Asísk kóbra er samsett úr mörgum undirtegundum, sumar þeirra eru ekki mjög ákveðnar í flokkun.Til dæmis er nú viðurkennt það sem áður var kallað Cobra Outer Caspian undirtegundin
Það ætti að rekja til Cobra ytra Kaspíahafsins.Þar sem það eru margar undirtegundir og þeim er blandað saman er samsetning snákaeiturs mjög mismunandi vegna mismunandi uppspretta og innihald PLA2 samsæta er einnig hátt.Til dæmis, cobra eitri
Að minnsta kosti 9 tegundir af PLA2 samsætum af r ^ ll tegundum fundust í og 7 tegundir af PLA2 samsætum fundust í eitri kóbra undirtegundar Kaspía.Durkin o.fl.(1981) rannsökuðu PLA2 innihald og fjölda samsæta í mismunandi snákaeitri, þar á meðal 18 kóbraeitur, 3 mamba eitur, 5 nörungaeitur, 16 hristusnákaeitur og 3 sjósnákaeitur.Almennt séð er PLA2 virkni kóbraeitursins mikil, með mörgum samsætum.PLA2 virkni og ísósím eiturs við nörunga eru miðlungs.PLA2 virkni mamba eiturs og skröltorms eiturs er mjög lítil eða engin PLA2 virkni.PLA2 virkni sjósnákaeiturs er einnig lítil.
Undanfarin ár hefur ekki verið greint frá því að PLA2 í snákaeitri sé til í formi virks dímer, eins og austur rhombophora skröltormurinn (C. snákaeitur inniheldur tegund a og tegund P PLA2, sem báðar eru samsettar úr tveimur eins undireiningum , og aðeins dimerase hefur
Virkni.Shen o.fl.lagði einnig til að aðeins dimer PLA2 af snákaeitrinu væri virka form ensímsins.Rannsóknin á staðbundinni uppbyggingu sannar einnig að PLA2 vestræns demantsbaks skröltorms er til í formi dimers.Fisketandi efnasamband
Það eru tvö mismunandi PLA ^ Ei og E2 af snákaeitri, þar sem 仏 er til í formi dimer, dimer er virk og aðskilin einliða hennar er óvirk.Lu Yinghua o.fl.(1980) rannsakað frekar eðlis- og efnafræðilega eiginleika og hvarfhvörf E. Jayanthi o.fl.(1989) einangruðu grunn PLA2 (VRVPL-V) úr eitri á nörunga.Mólþungi einliða PLA2 er 10000, sem hefur banvæn, segavarnarlyf og bjúgáhrif.Ensímið getur fjölliðað fjölliður með mismunandi mólþunga undir PH 4,8, og fjölliðunarstig og mólþungi fjölliða eykst með hækkun hitastigs.Mólþungi fjölliðunnar sem myndast við 96°C er 53.100 og PLA2 virkni þessarar fjölliða eykst um tvo
Pósttími: 18. nóvember 2022